Biotransformation und Bioverfügbarkeit von Wirkstoffen aus Radix Astragali von Poria Cocos während der Feststoffphase

Apr 22, 2024

Scientific Reports Band 13, Artikelnummer: 6888 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Radix Astragali ist eines der bekanntesten und am häufigsten verwendeten Nahrungsergänzungsmittel und pflanzlichen Arzneimittel. Unter den mehr als 227 Bestandteilen von Radix Astragali ist Astragalosid IV (AG IV) eine berühmte funktionelle Verbindung und wird häufig als Qualitätsmarker für Radix Astragali verwendet. Allerdings schränkt der relativ geringe Gehalt an AG IV in Radix Astragali (< 0,04 %, w/w) seine Anwendung stark ein. Der Zweck dieser Studie besteht darin, die Biotransformation von AG IV und seine Biozugänglichkeit während der In-vitro-Verdauung durch feste fermentierende Radix Astragali aus Poria cocos zu verbessern. Die optimalen Fermentationsbedingungen waren wie folgt: Beimpfungsmenge 8 ml; Fermentationszeit 10 d; Gärfeuchtigkeit 90 %. Durch die Fermentation wurde der Gehalt an AG IV von 384,73 auf 1986,49 μg/g um das 5,16-fache erhöht. Nach der In-vitro-Verdauung betrugen die Gehalte an Genistin, Calycosin, Formononetin, AG IV, Astragalosid II (AG II) und Gesamtflavonoiden in fermentiertem Radix Astragali (FRA) der enterischen Phase II (ENTII) 34,52 μg/g bzw. 207,32 μg/g , 56,76 μg/g, 2331,46 μg/g, 788,31 μg/g, 3,37 mg/g, was 2,08-fach, 2,51-fach, 1,05-fach, 8,62-fach, 3,22-fach und 1,50-fach höher war als die von Kontrolle bzw. Die Rasterelektronenmikroskopie (REM) von FRA zeigte eine raue Oberfläche und eine poröse Struktur. Die DPPH- und ABTS-Radikalfängerrate von FRA war höher als die der Kontrolle. Diese Ergebnisse zeigten, dass die feste Fermentation von Poria cocos den Gehalt an AG IV in Radix Astragali erhöhen und die Bioverfügbarkeit und antioxidative Aktivität von Radix Astragali verbessern könnte, was neue Ideen für die zukünftige Entwicklung und Nutzung von Radix Astragali liefert.

Radix Astragali ist die getrocknete Wurzel von Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao oder A. membranaceus (Fisch.) Bge. in der Familie der Hülsenfrüchte. Es ist in China ein berühmtes traditionelles Arzneimittel und gesundes Nahrungsergänzungsmittel mit positiven Auswirkungen auf die menschliche Gesundheit1. Darüber hinaus wird es häufig als Gesundheitszusatz in Lebensmitteln, Tees, Getränken, Weinen usw. eingesetzt. Radix Astragali ist reich an biologisch aktiven Verbindungen wie Astragalosiden, Flavonoiden, Polysacchariden und verschiedenen Spurenelementen2. Unter ihnen ist AG IV die Verbindung mit der höchsten Bedeutung für die pharmakologischen Aktivitäten und die therapeutische Wirksamkeit. Moderne pharmakologische Studien haben gezeigt, dass es gute Auswirkungen auf das Herz-Kreislauf-System, das Immun-, Verdauungs- und Nervensystem hat. Es gab viele therapeutische Wirkungen für AG IV, wie z. B. entzündungshemmende, antifibrotische, antioxidative Stress-, Anti-Asthma-, Anti-Diabetes-, Immunregulations- und kardioprotektive Wirkung3,4. Allerdings ist die Extraktionsrate von AG IV in Radix Astragali durch die konventionelle Produktionstechnologie begrenzt. Und in Radix Astragali sind jede Menge Lignin, Zellulose und Pektin fest an bioaktive Verbindungen gebunden, und diese Substanzen hemmen die Freisetzung bioaktiver Verbindungen in das Verdauungssystem. Um dieses Problem zu lösen, widmen sich einige Studien dem Mikrobenferment Radix Astragali. Durch die mikrobielle Fermentation kann ein Multienzymsystem entstehen, das die anderen Astragaloside in AG IV5 umwandeln kann. Andererseits können die Enzyme das Lignin, die Cellulose und das Pektin von Radix Astragali6 hydrolysieren, was die Freisetzung des AG IV fördern kann.

Poria cocos ist das getrocknete Sklerotium von Poria cocos (Schw.)Wolf., einem wichtigen Speise- und Heilpilz. Es hat eine lange Geschichte der medizinischen Verwendung in China und anderen asiatischen Ländern7. Untersuchungen haben gezeigt, dass Poria-Kokosfrüchte über biologische Aktivitäten verfügen, die als Regulierung der Immunfunktion, Antitumor- und Entzündungshemmung usw. beschrieben werden8. In den letzten Jahrzehnten wurde die Fermentationskultur von Poria cocos aufgrund des Potenzials für eine erhöhte Produktion von Myzelien und bioaktiven Komponenten auf kompaktem Raum und in kürzerer Zeit entwickelt. Während des Fermentationsprozesses nutzt Poria Cocos Zellulose und andere Bestandteile als Kohlenstoffquelle vollständig aus, um die Zellwand der Pflanze abzubauen, was zur Freisetzung der bioaktiven Verbindungen der Pflanze beiträgt. Darüber hinaus wird es aufgrund seiner Nähr- und Gesundheitswerte auch als Functional Food eingesetzt. Die kombinierte Anwendung von Radix Astragali und Poria cocos hat eine lange Geschichte und hat eine tonisierende Wirkung auf Milz und Niere. Bisher gibt es keine Berichte über die Fermentation von Radix Astragali mit Poria-Kokos.

Derzeit werden In-vitro-Verdauungstechniken häufig zur Untersuchung der Bioverfügbarkeit von Kräutern und Lebensmitteln eingesetzt, um die physikalisch-chemischen Veränderungen und den Metabolismus funktionell aktiver Substanzen während der Verdauung besser untersuchen zu können. Die mikrobielle Fermentation kann die Freisetzung bioaktiver Verbindungen in das Verdauungssystem fördern. Um die Bioverfügbarkeit und Verdauung von Radix Astragali vor und nach der Fermentation zu untersuchen, wurden in der Studie In-vitro-Verdauungsexperimente durchgeführt. Das In-vitro-Verdausystem ist ein In-vitro-Modell zur Vorhersage oder Bewertung der Verdaulichkeit, Biozugänglichkeit, Freisetzungskinetik und strukturellen Veränderungen von Verbindungen auf der Grundlage physiologischer Prozesse des menschlichen Magen-Darm-Trakts und zur Simulation der In-vivo-Verdauung und -Absorption unter In-vitro-Bedingungen. Das System kann In-vivo-Tests ganz oder teilweise ersetzen und bietet die Vorteile von Kosteneinsparungen, kürzeren Testzyklen, Genauigkeit und manueller Überwachung.

In dieser Studie wurde Radix Astragali durch Poria cocos fermentiert und mithilfe von In-vitro-Verdauung und antioxidativer Technik die Bioverfügbarkeit und antioxidative Aktivität vor und nach der Pilzfermentation untersucht, was eine neue Idee für die zukünftige Forschung von Radix Astragali lieferte.

Es wurde eine Zeitverlaufsstudie zur Massenansammlung von Poria cocos durchgeführt, die in 100 ml 26,1 g/L flüssigem Kartoffelmedium kultiviert wurden. Zunächst wurde die Kinetik der Wachstumskurven von Poria cocos bestimmt (Abb. 1). Von 2 bis 6 Tagen nahm das Trockengewicht des Myzels schnell zu, was der logarithmischen Phase von Poria cocos entspricht. Am 6. Tag stabilisiert sich der Wachstumstrend der Poria-Kokos tendenziell. Die Spitzen traten nach 7 Tagen auf. Nach 7 Tagen trat die Kultur in eine Seneszenzphase ein. Am 7. Tag erreichte die Kultur die maximale Massenakkumulation und die Produktion von Sekundärmetaboliten erreichte ihr Maximum. Anhand der Wachstumskurve von Poria cocos zur Bestimmung der Inkubationszeit von Poria cocos9.

Wachstumskurven von Poria-Kokos.

Flavonoide und Saponine sind die Grundwirkstoffe von Pflanzenextrakten. Der Gehalt an Flavonoiden und Saponinverbindungen im fermentierten Radix Astragali-Extrakt wurde mittels Spektrophotometer und HPLC bestimmt. Nach der Fermentation stiegen die Gehalte an AG IV und Genistein an. Zu den Faktoren, die den festen fermentierten Radix Astragali aus Poria cocos betreffen, gehören die Beimpfmenge, die Fermentationszeit und die Fermentationsfeuchtigkeit. Der Einfluss jedes Faktors wurde durch Einzelfaktorexperimente untersucht. Alle Tests wurden dreifach durchgeführt.

Der Einfluss der Impfmenge auf die Fermentation wurde unter den Bedingungen einer Fermentationstemperatur von 27 °C, einer Fermentationszeit von 7 Tagen und einer Fermentationsfeuchtigkeit von 90 % untersucht. Die Impfmenge lag für den Einzelfaktor-Optimierungstest zwischen 4 und 9 ml (Tabelle 1). Nach der Fermentation zeigten die Gehalte an Flavonoiden, Saponinen und anderen aktiven Bestandteilen in Radix Astragali unterschiedliche Trends. Die Gehalte an Calycosin-7-O-β-d-glucopyranosid (Calycosin-glu), Ononin, Calycosin und Formononetin waren deutlich reduziert. Der Gehalt an Gesamtsaponinen veränderte sich kaum und der Gehalt an Gesamtflavonoiden erhöhte sich. Mit der Erhöhung der Impfmenge von 4 auf 8 ml stiegen die Gehalte an Genistein und AG IV. Wenn die Impfmenge 8 ml überstieg, verringerten sich die Gehalte beider Verbindungen. Die Verringerung des Gehalts an Calycosin-Glu und anderen Bestandteilen kann auf hydrolytische Enzyme zurückzuführen sein, die von Poria cocos produziert werden. Diese Komponenten wurden weiter in andere Sekundärmetaboliten oder kleinere Moleküle umgewandelt10. Die Poria cocos können im Wachstums- und Fortpflanzungsprozess einige Enzyme produzieren, die Zellulose, Pektin und andere Substanzen in der Zellwand von Radix Astragali abbauen und die Freisetzung chemischer Komponenten erleichtern können. Der Anstieg des AG IV-Gehalts kann auf den Metabolismus oder die Biotransformation anderer Astragaloside als Vorläufer im Fermentationsprozess zurückzuführen sein11. Mit zunehmender Impfmenge nahm der Gehalt an AG IV und anderen Komponenten ab. Daher wurden 8 ml Saatfermentationsbrühe als optimale Beimpfmenge gewählt.

Der Einfluss der Fermentationszeit wurde unter den Bedingungen einer Fermentationstemperatur von 27 °C, einer Impfmenge von 8 ml und einer Fermentationsfeuchtigkeit von 90 % untersucht. Die Fermentationszeit lag für das Einzelfaktor-Optimierungsexperiment zwischen 6 und 11 Tagen (Tabelle 2). Die Veränderungen des Gehalts an Flavonoiden, Saponinen und anderen Wirkstoffen in Radix Astragali nach der Fermentation waren schwankend. Die Gehalte an Calycosin-glu, Ononin, Calycosin, Formononetin und AG II waren nach der Fermentation deutlich reduziert. Der Gehalt an Gesamtsaponinen war niedriger als bei der Kontrolle und der Gehalt an Gesamtflavonoiden stieg an. Mit der Zunahme der Fermentationstage stieg der Gehalt an Genistin und AG IV zunächst an und nahm dann ab. Der maximale Gehalt an Genistin betrug am 7. Tag der Fermentation 34,75 μg/g und der maximale Gehalt an AG IV betrug am 10. Tag der Fermentation 775,79 μg/g. Poria-Kokos wuchsen und verstoffwechselten sich in der frühen Phase der Fermentation kräftig. Mit der Zunahme der Fermentationstage alterte die Sorte jedoch allmählich, der Nährstoffverbrauch nahm zu und die Metaboliten gingen zurück12. Nach 10 Tagen erreichte die Massenakkumulation des Gehalts an AG IV das Maximum, daher wurden 10 Tage als optimale Fermentationszeit gewählt.

Die Fermentationsfeuchtigkeit wurde unter Verwendung unterschiedlicher Luftfeuchtigkeiten – z. B. 65 %, 90 %, 115 %, 140 % und 165 % – unter den Bedingungen einer Fermentationstemperatur von 27 °C, einer Impfmenge von 8 ml und einer Fermentationszeit von 10 Tagen untersucht (Tabelle 3). Mit steigender Luftfeuchtigkeit stiegen die Gehalte an AG IV, AG II und Gesamtflavonoiden an und sanken dann, und der Gehalt an Genistin stieg deutlich an. Der höchste Gehalt an Genistein betrug 48,65 μg/g bei einer Luftfeuchtigkeit von 165 % und der höchste Gehalt an AG IV betrug 1986,49 μg/g bei einer Luftfeuchtigkeit von 90 %. Tabelle 3 zeigt, dass mit der Erhöhung der Luftfeuchtigkeit von 65 auf 90 % der Gehalt an AG IV allmählich zunahm. Mit der Erhöhung der Luftfeuchtigkeit auf 165 % verringerte sich jedoch der Gehalt an AG IV. Möglicherweise verringerte die Erhöhung der Fermentationsfeuchtigkeit die Dichte der Stämme und löste die Kontakthemmung von Poria cocos, was das Wachstum und den Stoffwechsel von Poria cocos förderte. Zu viel Wasser führte jedoch dazu, dass die Rückstände von Radix Astragali klebrig wurden, was zu einer schlechten Durchlässigkeit und einer Umgebung mit weniger gelöstem Sauerstoff für Poria-Kokos führte. Es war nicht förderlich für das Wachstum und den Stoffwechsel von Poria cocos. Da der Gehalt an AG IV bei einer Luftfeuchtigkeit von 90 % am stärksten anstieg, wurde 90 % als optimale Gärfeuchtigkeit gewählt.

In den Ein-Faktor-Fermentationsversuchen schwankten die Gehalte an Flavonoiden, Saponinen und anderen Wirkstoffen. In Kombination mit den Wachstumskurven von Poria cocos (Abb. 1) könnten die Veränderungen des Inhalts auf das Wachstum von Poria cocos zurückzuführen sein, das die Biotransformation von Radix Astragali beeinflusste. Die Fermentationsbedingungen verursachten große Schwankungen im Gehalt an AG II. Dieses Phänomen kann durch die Biotransformation von Saponinen verursacht werden, wobei die anderen Saponine zunächst in AG II und dann in AG IV13 umgewandelt werden.

Eine gründliche Analyse der tabellarischen Daten zeigte den Gehalt von AG IV des maximalen Faktors für die optimalen Bedingungen. Mittlerweile wird AG IV im chinesischen Arzneibuch offiziell als Qualitätsmerkmal für Radix Astragali verwendet. Die optimalen Fermentationsbedingungen der Fermentation waren wie folgt: 20 g Radix Astragali, 90 % Luftfeuchtigkeit und 8 ml Impfmenge wurden zugegeben und 10 Tage bei 27 °C fermentiert. Unter optimalen Fermentationsbedingungen betrug der Gehalt an AG IV 1986,49 μg/g, was 5,16-mal höher war als bei der Kontrolle.

Bioverfügbarkeit kann als die Menge definiert werden, die aus der Nahrungsmatrix im Magen-Darm-Trakt freigesetzt wird und für die Absorption zur Verfügung steht. Es ist jedoch schwierig, die in vivo-Veränderungen dieser Komponenten während ihrer Passage durch den Verdauungstrakt zu untersuchen. Die In-vitro-Messung der Bioverfügbarkeit gilt heute als zuverlässige Methode zur Beurteilung der Verfügbarkeit von Nahrungsbestandteilen. Die in vitro simulierte Magen-Darm-Methode besteht aus vier Phasen: orale Phase (OP), Magenphase (GP), enterische Phase I (ENTI) und ENTII.

Tabelle 4 zeigt die Auswirkungen der In-vitro-Verdauung auf die Gehaltsveränderungen der wichtigsten wirksamen Bestandteile in Radix Astragali vor und nach der Fermentation. Die Gehalte an Genistin, Calycosin, Formononetin, AG IV, AG II in der FRA stiegen signifikant an, und die Gehalte jeder Komponente in ENTII betrugen 34,52, 207,32, 56,76, 2331,46 und 788,31 μg/g, was dem 2,08-fachen, 2,51-fachen entspricht. 1,05-fach, 8,62-fach bzw. 3,22-fach höher als die der Kontrolle. Dies ist darauf zurückzuführen, dass die Fermentation im festen Zustand zur Zerstörung der Zellwand von Radix Astragali führte und die Freisetzung von Flavonoiden und Saponinen förderte. Andererseits steigerte die Magen-Darm-Verdauung die Freisetzung wirksamer Bestandteile von Radix Astragali deutlich. Durch die Wirkung der gastrointestinalen Verdauungsenzyme wurden die Zellstruktur von Radix Astragali und die chemische Bindung der Acetylgruppe und der Glykosidgruppe zerstört und kombinierte Flavonoide und Saponine wurden freigesetzt14. Die Gehalte an Calycosinglucosid und Ononin nahmen deutlich ab.

In OP und GP veränderten sich die Gehalte an Flavonoiden und Saponinen der Kontrolle und der FRA kaum. Nach sukzessiver Verdauung in ENTI und ENTII stiegen die Gehalte an Flavonoiden und Saponinen an, insbesondere die Gesamtsaponine stiegen deutlich an. Der Grund könnte darin liegen, dass sich Flavonoid- und Saponinbestandteile in einer sauren Umgebung befanden (während der Verdauung im Magen), was ihre Freisetzung unterdrücken könnte, während Verdauungsenzyme im Darm Proteine ​​hydrolysieren könnten, um die proteinverkapselten Flavonoide freizusetzen oder Saponine und können in der schwach sauren Umgebung stabil existieren15.

Die Biozugänglichkeitsdaten von FRA und Kontrolle sind in Tabelle 4 aufgeführt. Die Biozugänglichkeit von Calycosin, Formononetin, AG IV, AG II, Gesamtsaponinen und Gesamtflavonoiden im FRA betrug 274,34 %, 260,61 %, 117,36 %, 83,63 %, 437,83 % und 125,28 % und die der Kontrolle betrugen 53,37 %, 90,48 %, 70,29 %, 45,30 %, 245,82 % bzw. 96,98 %. Die Bioverfügbarkeit dieser Komponenten im FRA war höher als die der Kontrolle. Allerdings war die Bioverfügbarkeit von Calycosin-glu, Genistin und Ononin im FRA geringer als bei der Kontrolle. Diese Ergebnisse sind möglicherweise darauf zurückzuführen, dass die Glucoside viel Oxhydryl enthalten, das fest an Cellulose gebunden ist. Nach der Fermentation produziert die Poria-Kokosnuss Enzyme zur Hydrolyse von Zellulose, die die Glukoside freisetzen können. Und das von Poria cocos produzierte Multienzymsystem könnte die Biotransformation von Glukosiden fördern. Andererseits könnten die Verdauungsenzyme während der In-vitro-Verdauung Glucoside in Aglykone umwandeln16. Somit war die Biozugänglichkeit von Aglykonen im FRA höher als die der Kontrolle und die Biozugänglichkeit von Glukosiden im FRA niedriger als die der Kontrolle.

Es ist ein interessantes Phänomen, dass die Gehalte einiger bioaktiver Komponenten der Kontrolle und des FRA im Fermentationsexperiment höher waren als im vitro-Verdauexperiment. Beispielsweise betrug der Gehalt an Calycosin in der Kontrolle 155,05 μg/g in Tabelle 3 und 41,08 μg/g in Tabelle 4 von OP. Der Gehalt an Calycosin in FRA betrug 75,57 μg/g in Tabelle 3 und 62,34 μg/g in Tabelle 4 von OP. Einerseits könnte es daran liegen, dass die Löslichkeit der bioaktiven Komponenten in Ethanol und Verdauungslösung unterschiedlich war. Andererseits war der Gehalt an Calycosin in FRA höher als der der Kontrolle in OP, da der mit Poria cocos fest fermentierte Radix Astragali die Freisetzung bioaktiver Komponenten fördern konnte. Daraus ist ersichtlich, dass das mit Poria Cocos fest fermentierte Radix Astragali die Bioverfügbarkeit von Radix Astragali verbessern könnte. Kurz gesagt, In-vitro-Verdauungsexperimente bestätigen, dass das FRA eine höhere Biozugänglichkeit als die Kontrolle aufweist, was wertvolle Informationen für FRA in verschiedenen Verdauungsstadien liefert.

Die Proben wurden mit EVO LS15 SEM bei einer 2000-fachen Vergrößerung untersucht, um die strukturellen Veränderungen der Radix Astragali durch Fermentation und In-vitro-Verdau zu untersuchen. Abbildung 2 zeigt die Kontrolle (A), die Kontrolle in der Magenverdauung (B), die Kontrolle in der enterischen II-Verdauung (C), die FRA (D), die FRA in der Magenverdauung (E) und die FRA in die enterische II-Verdauung (F). Die Kontrolloberfläche war glatt, im Grunde genommen ohne Löcher und mit einer geringen Menge an Partikeln behaftet. Abbildung 2A zeigte, dass die Kontrollzellen offensichtlich nicht zerstört wurden und immer noch die intakte Gewebestruktur beibehielten. Nach der Fermentation waren die Mikrostrukturen in Abb. 2D desorganisiert. Die Oberfläche der FRA-Rückstände war rau, porös und netzartig strukturiert. Diese Ergebnisse könnten darauf zurückzuführen sein, dass das Myzel von Poria cocos direkt in die Arzneimittelrückstände eindringen und die inneren Zellen von Radix Astragali zerstören könnte.

Rasterelektronenmikroskopische Aufnahmen jeder Probe von Radix Astragali ((A) die Kontrolle, (B) die Kontrolle in der Magenverdauung, (C) die Kontrolle in der enterischen II-Verdauung, (D) die FRA, (E) die FRA in der Magenverdauung, (F) die FRA bei der enterischen II-Verdauung).

Nach der Magenverdauung veränderten sich die elektronenmikroskopischen Aufnahmen beider Proben deutlich. Unter der Einwirkung von Pepsin und saurer Aufschlussflüssigkeit wurde die Probe stark geschädigt. Die Oberfläche wurde uneben und es wurden viele Partikel beobachtet. Wie aus Abb. 2B, E ersichtlich ist, wurden die Fermentationsproben stärker zerstört als die Kontrollproben. Die Ergebnisse könnten mit der Zerstörung von Radix Astragali durch Poria cocos zusammenhängen. Nach der Fermentation zeigte die Oberfläche von Radix Astragali eine poröse Netzstruktur, die die Expositionsfläche vergrößerte und die Wirkstoffe leichter verdaulich und löslich machte. Nach der enterischen II-Verdauung waren beide Proben stark zerstört und die elektronenmikroskopischen Aufnahmen von Abb. 2C,F unterschieden sich nicht wesentlich von denen von Abb. 2B,E.

Die verschiedenen Bestandteile von Radix Astragali haben eine antioxidative Wirkung. Bei der Fermentation und dem In-vitro-Verdau zeigten die Gehalte an AG IV, AG II, Calycosin und Genistin signifikante Veränderungen, daher wurden ihre Standards als Referenz für die Antioxidansexperimente von Radix Astragali ausgewählt. Hier wurden die antioxidativen Kapazitäten von Ascorbinsäure (Vc), nicht fermentierten Radix-Astragali-Extrakten (Kontrolle), FRA-Extrakten und ihren In-vitro-Verdauungsprodukten mit einem DPPH-Radikalfängertest und einem ABTS-Radikalfängertest bewertet.

Die DPPH-Antioxidationsergebnisse von Extrakten und in vitro verdauten Proben von Radix Astragali sind in Abb. 3 dargestellt. Der IC50-Wert von FRA betrug 0,140 mg/ml, was höher war als der IC50-Wert des Referenz-Vc (0,002 mg/ml). Calycosin (0,034 mg/ml), aber besser als die Kontrolle (0,367 mg/ml). Bei 0,4 mg/ml betrug die DPPH-Radikalabfangrate der Probe von hoch nach niedrig: Vc 98,25 %, Calycosin 87,86 %, FRA 63,81 %, Kontrolle 51,43 %, FRA (OP) 35,59 %, FRA (ENTII) 35,50 % , FRA (GP) 34,52 %, Kontrolle (OP) 31,96 %, FRA (ENTI) 31,94 %, Kontrolle (GP) 29,81 %, Genistin 24,52 %, Kontrolle (ENTII) 24,72 %, Kontrolle (ENTI) 20,42 %, AGII 8,81 % und AG IV 7,30 %.

DPPH-Radikalfängerrate jeder Probe von Radix Astragali, Standards und Vc.

Die ABTS-Antioxidationsergebnisse von Extrakten und in vitro verdauten Proben von Radix Astragali sind in Abb. 4 dargestellt. Der IC50-Wert der FRA-Extrakte betrug 0,064 mg/ml, was höher war als der IC50-Wert des Referenz-Vc (0,002 mg/ml). , Calycosin (0,003 mg/ml) und Genistin (0,030 mg/ml), aber überlegen gegenüber der Kontrolle (0,207 mg/ml). Im Bereich von 0,01–0,30 mg/ml nahm die antioxidative Kapazität der Probe mit zunehmender Massenkonzentration zu. Bei 0,29 mg/ml betrug die ABTS-Radikalabfangrate der Probe von hoch nach niedrig: Vc 99,86 %, Calycosin 99,28 %, FRA 98,60 %, Genistin 87,26 %, FRA (OP) 71,39 %, Kontrolle 68,72 %, FRA ( ENTI) 65,86 %, FRA (ENTII) 64,73 %, FRA (GP) 61,76 %, Kontrolle (OP) 46,44 %, Kontrolle (ENTII) 45,73 %, Kontrolle (ENTI) 45,30 %, Kontrolle (GP) 38,46 %, AG II 11,14 % und AG IV 7,09 %.

ABTS-Radikalfängerrate jeder Probe von Radix Astragali, Standards und Vc.

Nach der Fermentation und dem In-vitro-Verdau waren die DPPH- und ABTS-Antioxidationskapazitäten von FRA alle höher als die der Kontrolle. Allerdings nahm die antioxidative Aktivität von FRA und der Kontrolle nach der In-vitro-Verdauung ab, was möglicherweise darauf zurückzuführen ist, dass das Gewicht des Extrakts aus der Verdauungsflüssigkeit höher war als das von FRA und der Kontrolle. Bei gleicher Trockenmassekonzentration verringerte sich der Gehalt an antioxidativen Komponenten in den antioxidativen Proben, was sich auf die antioxidative Kapazität auswirkte.

Zusammenfassend wurde ein Schema der festen Fermentation von Radix Astragali mit Poria Cocos vorgeschlagen, um den Gehalt des Hauptwirkstoffs in Radix Astragali (AG IV) zu erhöhen. Durch die Optimierung des Fermentationsprozesses werden die besten Fermentationsbedingungen erreicht: Beimpfungsmenge 8 ml; Fermentationszeit 10 Tage; Gärfeuchtigkeit 90 %. Unter optimalen Bedingungen stieg der Gehalt an AG IV von 384,73 auf 1986,49 μg/g um das 5,16-fache. Darüber hinaus wurde die Bioverfügbarkeit von FRA durch In-vitro-Verdau untersucht. Nach der In-vitro-Verdauung betrugen die Gehalte an Genistin, Calycosin, Formononetin, AG IV, AG II und den Gesamtflavonoiden von FRA in ENTII 34,52 μg/g, 207,32 μg/g, 56,76 μg/g, 2331,46 μg/g, 788,31 μg/g. g, 3,37 mg/g, was 2,08-fach, 2,51-fach, 1,05-fach, 8,62-fach, 3,22-fach bzw. 1,50-fach höher war als die der Kontrolle. Und die Bioverfügbarkeit von Calycosin, Formononetin, AG IV, AG II, Gesamtsaponinen und Gesamtflavonoiden des FRA betrug 274,34 %, 260,61 %, 117,36 %, 83,63 %, 437,83 % und 125,28 % und die der Kontrolle betrug 53,37 %, 90,48 %, 70,29 %, 45,30 %, 245,82 % bzw. 96,98 %. Wie durch SEM beobachtet, war die Oberfläche von FRA und seinem In-vitro-Verdaurückstand rau und porös, zeigte eine klarere Netzstruktur und die Oberfläche war größer als bei der Kontrolle. Im DPPH- und ABTS-Radikalfängertest betrug der IC50-Wert von FRA 0,140 mg/ml und 0,064 mg/ml und lag damit über dem der Kontrolle (0,367 mg/ml, 0,207 mg/ml). Diese Ergebnisse zeigten, dass das Antioxidans von FRA höher war als das der Kontrolle. Nach der In-vitro-Verdauung weisen die FRA immer noch eine gute antioxidative Aktivität auf. In dieser Studie wurde Poria Cocos zum ersten Mal zur Fermentation von Radix Astragali verwendet, um die Biotransformation bioaktiver Komponenten abzuschließen. Das FRA weist eine hohe Bioverfügbarkeit und eine starke antioxidative Aktivität auf, was eine Grundlage für die Entwicklung und Verwendung von Radix Astragali bildete.

Radix Astragali, die getrocknete Wurzel von Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao wurde von Shanxi Hunyuan Wansheng Huangqi Development Co., Ltd (Shanxi, China) gekauft und von Prof. Ying Lin an der Binzhou Medical University (Yantai, Shandong) authentifiziert. Belegexemplare wurden im Herbarium des Experimentellen Zentrums für Chinesische Medizin der Medizinischen Universität Binzhou hinterlegt und die Zugangsnummer lautete 2021–1003. Radix astragali wurde mit einem 800-A-Desintegrator (Yongkang Hardware and Medical Instrument Plant, China) pulverisiert und durch ein Maschensieb geleitet, um ein feines Pulver mit einer Partikelgröße von 600 μm zu erhalten. Poria Cocos (Bio-08656) wurde von Beijing Bai Ou Bo Wei Biotechnology Co., Ltd. (Peking, China) gekauft. Ameisensäure, Methanol und Acetonitril in chromatographischer Qualität wurden von Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. (Tianjin, China) bezogen. Das im gesamten Experiment verwendete Reinstwasser wurde mit einem Milli-Q-Wasseraufbereitungssystem von Millipore (Bedford, MA, USA) gereinigt. PDA-Medium und flüssiges Kartoffelmedium wurden von Qingdao Haibo Biotechnology Co., Ltd. (Qingdao, China) gekauft. Kaliumphosphat, Kaliumdihydrogenphosphat, Natriumcarbonat, Kaliumpersulfat und Natriumhydroxid wurden von Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, China) bezogen. Speichelamylase (BR, 4000 u/g), Pepsin (USP-Qualität, 1:3000), Magenlipase (BR, 30.000 u/g), Pankreasenzym (BR, 1600 u/g) und Schweinegallenpulver (BR) wurden von erworben Shanghai Yuanye Biotech Co. (Shanghai, China). 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl und 2,2-Hydrazin-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure)diaminsalz wurden von Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. (Shanghai, China) gekauft. Natriumnitrit wurde von Tianjin Bodi Chemical Co., Ltd. (Tianjin, China) gekauft. Aluminiumnitrat wurde von Shanghai Walkai Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, China) gekauft, wasserfreies Ethanol wurde von Tianjin Yongda Chemical Reagent Co., Ltd. (Tianjin, China) gekauft. Vanillin wurde vom Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute gekauft. Rutin (≥ 98 %), Ononin (≥ 98 %), Genistin (≥ 98 %), Calycosin (≥ 98 %), Calycosin-glu (≥ 99 %), Formononetin (≥ 99 %), AG II (≥ 98 % ) und AG IV (≥ 98 %) wurden von Chengdu Pusi Biotech Co. (Chengdu, China) gekauft.

Alle Methoden dieser Studie wurden in Übereinstimmung mit den einschlägigen Richtlinien und Vorschriften des Arzneibuchs der Volksrepublik China durchgeführt.

Poria cocos wurde auf der Kulturschale mit 46,0 g/L PDA-Medium beimpft, bis sich das Myzel über die gesamte Kulturschale verteilte. Anschließend wurde das inokulierte Myzel in 100 ml 26,1 g/L flüssigem Kartoffelmedium auf einem ZQPW-70-Schüttelinkubator (Tianjin Laboratory Instrument Equipment Co., Ltd, Tianjin, China) bei 27 °C und 180 U/min 2 Tage lang kultiviert. 10 Tage. Nach der Inkubation wurden die Myzelien während der Filtration mit Wasser gewaschen. Die Proben wurden bis zur Gewichtskonstanz in einen Ofen bei 60 °C gestellt und dann das Trockengewicht des Myzels gemessen. Jede Gruppe hatte drei parallele Proben.

Zwanzig Gramm Radix Astragali-Pulver und 5–25 ml hochreines Wasser wurden in die Fermentationsbeutel gegeben. Die Mischung wurde 25 Minuten lang bei 121 ° C in einen YXQ-Sll-Autoklaven (Shanghai Boxun Medical Biological Instrument Co., Ltd, Shanghai, China) gegeben. Danach wurden 4–9 ml Samenfermentationsbrühe auf das medizinische Pulver des Fermentationsbeutels geimpft. Anschließend wurde die Mischung in einem GSP-9160MBE-Inkubator mit konstanter Temperatur und Luftfeuchtigkeit (Shanghai Boxun Medical Biological Instrument) 6 bis 11 Tage lang bei 27 ° C inkubiert. Jede Gruppe hatte drei parallele Proben. Das Foto des mit Poria Cocos fermentierten Radix Astragali ist in Abb. 5A dargestellt. Bei den Kontrollversuchen handelte es sich ausschließlich um Radix Astragali-Pulver mit autoklavierter Behandlung ohne Poria cocos. Und hochreines Wasser ersetzte die Fermentationsbrühe der Samen, um den gleichen Feuchtigkeitsgehalt aufrechtzuerhalten.

Foto von Poria cocos fermentiertem Radix Astragali ((A) dem fermentierten Radix Astragali, (B) den kleinen Stücken von FRA, (C) dem Pulver von FRA).

Die in vitro simulierte Magen-Darm-Methode besteht aus vier Phasen: orale Phase OP, GP, ENTI und ENTII.

Das FRA (Abb. 5A) wurde in kleine Stücke gebrochen (Abb. 5B) und bei 60 °C getrocknet. Die getrockneten Proben wurden mit einem Desintegrator zu Pulvern gemahlen und durch ein 60-Mesh-Sieb gegeben (Abb. 5C).

Fünf Gramm der fermentierten Probe und der Kontrolle wurden nach der Sterilisation in verschiedene konische Flaschen gegeben. Zehn Milliliter 20 mmol/L Phosphorsäurepuffer wurden zugegeben, 0,9 % normale Kochsalzlösung wurde zu 125 ml hinzugefügt, der pH-Wert wurde mit 1 Mol/L NaOH-Lösung auf 7,0 eingestellt und 10 Minuten lang bei 37 °C gehalten. Abschließend wurden 0,2 mg Speichelamylase gleichmäßig gemischt zugegeben. Und in einen auf 37 °C vorgeheizten Wasserbadoszillator mit konstanter Temperatur und 55 U/min für 2 Minuten im Dunkeln stellen. Vier Gruppen wurden gleichzeitig verdaut. Nach dem Aufschluss wurden sie 2 Minuten lang in Wasser zum Sieden erhitzt. Eine Gruppe wurde gelagert und die restlichen 3 Gruppen wurden für die nächste Verdauungsstufe weitergeführt. Drei parallele Proben für jede Gruppe.

Nach der oralen Verdauung wurden den verbleibenden drei Gruppen von Verdauungsproben 125 ml mit 0,9 % normaler Kochsalzlösung zugesetzt. Der pH-Wert wurde nach dem Mischen mit 1 mol/L HCl-Lösung auf 2,0 eingestellt und 10 Minuten lang bei 37 °C in einem Wasserbadoszillator mit konstanter Temperatur gehalten. Dann wurden 0,375 g Pepsin und 0,1125 mg Lipase hinzugefügt und gut gemischt. Und in einen auf 37 °C vorgeheizten Wasserbadoszillator mit konstanter Temperatur und 150 U/min für 2 Stunden im Dunkeln stellen. Nach dem Aufschluss wurden sie 2 Minuten lang in Wasser zum Sieden erhitzt. Eine Gruppe wurde gelagert und die verbleibenden zwei Gruppen wurden für die nächste Verdauungsstufe weitergeführt.

Unter Bezugnahme auf die Forschung von Ningtyas et al.14 wurde die enterische Verdauungsphase in zwei Phasen unterteilt: ENTI und ENTII.

Nach der Magenverdauung wurden den verbleibenden zwei Gruppen von Verdauungsproben 125 ml mit 0,9 % normaler Kochsalzlösung zugesetzt. Der pH-Wert wurde mit 1 mol/L NaOH-Lösung auf 4,7 eingestellt und die Probe 10 Minuten lang bei 37 °C gehalten. Dann wurden 0,125 g Trypsin und 1,25 g Galle hinzugefügt und gut gemischt. Die enterische I-Stufe wurde 2 Stunden lang bei 37 °C und 150 U/min in einem Wasserbadoszillator im Dunkeln verdaut. Nach dem Aufschluss wurden sie 2 Minuten lang in Wasser zum Sieden erhitzt. Eine Gruppe wurde aufbewahrt und die andere für die nächste Verdauungsstufe weitergeführt.

Die letzte Gruppe der aufgeschlossenen Probe wurde auf die gleiche Weise zu 125 ml hinzugefügt, der pH-Wert wurde mit 1 mol/l NaOH-Lösung auf 6,5 eingestellt und die Probe wurde 10 Minuten lang bei 37 °C gehalten. Dann wurden 0,125 g Trypsin und 1,25 g Galle hinzugefügt und gut vermischt. Die enterische II-Stufe wurde 2 Stunden lang bei 37 °C und 150 U/min in einem Wasserbadoszillator im Dunkeln verdaut. Nach dem Aufschluss wurde es 2 Minuten lang in Wasser zum Sieden erhitzt und gelagert.

Die gelagerten Proben jeder Verdauungsstufe wurden 5 Minuten lang bei 12.000 U/min und 4 °C zentrifugiert. Der Überstand wurde gesammelt und zur Bestimmung der chemischen Zusammensetzung verwendet. Der restliche Rückstand wurde bei 60 °C getrocknet und für die SEM verwendet.

Als Bioverfügbarkeit wurde die Konzentration bioaktiver Verbindungen betrachtet, die durch die enterische In-vitro-Verdauung aus der Lebensmittelmatrix freigesetzt werden. Die Bioverfügbarkeit wird nach folgender Gleichung berechnet:

Dabei entsprechen BCverdaut und BCnichtverdaut der Konzentration der bioaktiven Verbindung in verdautem bzw. unverdautem Radix Astragali.

Die 5-g-Probe wurde genau abgewogen und 100 ml 70 %iges Ethanol in einen Erlenmeyerkolben gegeben. Die Mischung wurde 60 Minuten lang in einem Ultraschallbad mit einer Leistung von 100 W extrahiert. Die extrahierten Proben wurden filtriert und 5 Minuten lang bei 4 °C und 12.000 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde gesammelt und zur Bestimmung der chemischen Zusammensetzung verwendet.

Der Gesamtflavonoidgehalt wurde nach den Methoden von Liu et al.17 bestimmt und leicht modifiziert. Als Standard für die Kalibrierungskurve wurde Rutin verwendet. Rutin wurde in Ethanol mit einer Anfangskonzentration von 0,2 mg/ml gelöst. Die unterschiedlichen Volumina der Stammlösung mit 0, 0,2, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 und 2,4 ml wurden in 10-ml-Messkolben überführt und mit 2 ml 70 %igem Ethanol versetzt. Unter gleichmäßigem Schütteln wurden 0,3 ml einer 5 %igen NaNO2-Lösung zugegeben und 6 Minuten lang gehalten. Dann wurden 0,3 ml 10 %ige AlCl3-Lösung zugegeben und die Mischung gleichmäßig geschüttelt und 6 Minuten lang gehalten. Danach wurden 4 ml der 4 %igen NaOH-Lösung in den Messkolben gegeben. Das Volumen der Mischung wurde mit 70 % Ethanol maßstabsgetreu fixiert und 15 Minuten lang gehalten. Die Absorption dieser Mischungen wurde bei 510 nm mit dem UV-Visible-Spektrophotometer TU-1810 APC (Beijing Persee General Instrument Co., Ltd, Peking, China) gemessen und die Standardkurve erstellt.

Drei Milliliter der oben hergestellten Probenlösung wurden in 10-ml-Messkolben überführt. Die Absorptionsfähigkeit der Probe wurde mit der oben beschriebenen kolorimetrischen Methode bestimmt.

Der Gesamtgehalt an Saponinen wurde nach den Methoden von18 bestimmt und leicht modifiziert. Als Standard für die Kalibrierungskurve wurde AG IV verwendet. AG IV wurde in Ethanol mit einer Anfangskonzentration von 0,5 mg/ml gelöst. Die unterschiedlichen Volumina der Stammlösung mit 0,00, 0,05, 0,10, 0,20, 0,30, 0,40 ml wurden in 10-ml-Messkolben überführt und mit 70 % Ethanol auf 0,5 ml aufgefüllt. Unter gleichmäßigem Schütteln wurden 0,5 ml 8 %ige Vanillin-Ethanol-Lösung und 5,0 ml 72 %ige Schwefelsäure zugegeben. Nach gleichmäßigem Mischen wurde die Reaktionsmischung 20 Minuten lang bei 62 °C inkubiert. Anschließend wurde die Mischung in einem Eiswasserbad auf Raumtemperatur abgekühlt. Die Absorption dieser Mischungen wurde bei 540 nm mit dem UV-Vis-Spektrophotometer TU-1810 APC gemessen und die Standardkurve erstellt.

Die oben hergestellte Probenlösung (0,5 ml) wurde in 10-ml-Messkolben überführt. Die Absorptionsfähigkeit der Probe wurde mit der oben beschriebenen kolorimetrischen Methode bestimmt.

Astragalus-Flavonoide wurden mittels HPLC unter Verwendung eines HPLC-Systems der Thermo Scientific Dionex Ultimate 3000-Serie (Dionex, USA), eines Diodenarray-Detektors (Dionex, USA) und einer Kromasil 100–5-C18-Säule (4,6 x 250 mm) analysiert. Die Säulentemperatur wurde mit einem Injektionsvolumen von 10 µL bei 30 °C gehalten. Die mobile Phase bestand aus 0,05 % Ameisensäure in Wasser (A) und Acetonitril (B) unter Verwendung der folgenden Gradientenelutionssequenz: 0–5 Min., 0–5 % B; 5–10 Min., 5–20 % B; 10–25 Min., 20–25 % B; 25–35 Min., 25–30 % B; 35–40 Min., 30–35 % B; 40–54 Min., 35–40 % B; 54–55 Min., 40–0 % B. Die Flussrate wurde auf 1 ml/Min. eingestellt. Flavonoide wurden durch Überwachung der Absorption bei 254 nm nachgewiesen und quantifiziert, darunter Calycosin-glu, Genistin, Ononin, Calycosin und Formononetin. Ihre Molekülformeln und chemischen Strukturen sind in Tabelle 5 aufgeführt. Die Konzentrationen verschiedener Analyten wurden gemäß dem entsprechenden Standard bestimmt Kurven. Die Regressionsgleichungen waren y1 = 640,7x−0,1856 (R2 = 0,9994, n = 6); y2 = 886,38x−0,2805 (R2 = 0,9995, n = 6); y3 = 746,76x−0,2932 (R2 = 0,9995, n = 6); y4 = 995,48x−0,383 (R2 = 0,9995, n = 6); y5 = 1234x−0,5045 (R2 = 0,9994, n = 6), wobei y die Peakfläche des Analyten und x die Konzentration des Analyten (mg/ml) war.

Für die Bestimmung von AG IV und AG II wurde ein DGU-20A3R HPLC-System (SHIMADZU, Japan) gekoppelt mit einem ELSD-16 (SHIMADZU, Japan) verwendet, deren Molekülformeln und chemische Strukturen in Tabelle 5 aufgeführt sind. Die chromatographischen Trennungen wurden auf einer Phenomenex C18-Säule (4,60 × 250 mm, 5 μm) durchgeführt, die bei Raumtemperatur gehalten wurde. Die mobilen Phasen bestanden aus Acetonitril (A) und Wasser (B) mit einer Gradientenelution wie folgt: 0–20 min, 96–80 % B; 20–40 Min., 80–70 % B; 40–65 Min., 70–40 % B; 65–70 Min., 40–96 % B; 70–80 Min., 96 % B. Es wurde eine konstante Flussrate von 1,0 ml/Min. verwendet. Die Driftrohrtemperatur des ELSD wurde auf 100 °C eingestellt und die Trägergasdurchflussrate betrug 2,5 l/min. Das Probeninjektionsvolumen betrug 20 μl. Die Regressionsgleichungen für AG IV und AG II waren y6 = 1,5346x + 0,3752 (R2 = 0,9980, n = 6); y7 = 1,644x + 0,1816 (R2 = 1,0000, n = 6), wobei y die Peakfläche des Analyten und x die Konzentration des Analyten (mg/ml) war.

Zur Untersuchung der morphologischen Veränderungen der Proben wurde ein Rasterelektronenmikroskop EVO LS15 (Zeiss, Deutschland) mit Q150RS-Ionensputterbeschichter (Quorum, UK) verwendet. Die Proben vor und nach der Fermentation sowie die Probenrückstände aus jeder Phase der In-vitro-Verdauung wurden bei 60 °C getrocknet und zerkleinert. Die zerkleinerten Proben wurden mit leitfähigem Klebstoff auf dem REM-Probentisch fixiert und mit einem Ionensputter-Beschichter auf der Probenoberfläche mit Gold beschichtet. Anschließend wurden die Proben bei einer Beschleunigungsspannung von 10 kV (2000-fache Vergrößerung) beobachtet.

Der oben hergestellte Überstand wurde im Rotationsverdampfer RE-52AA (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory, Shanghai, China) unter Vakuum bei 55 °C zur Trockne konzentriert. Der getrocknete Extrakt wurde in wasserfreiem Ethanol gelöst, um Probenlösungen unterschiedlicher Konzentration zur Bestimmung der antioxidativen Aktivität herzustellen.

Die antioxidative Aktivität wurde durch die freie Radikalfängeraktivität von 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) erreicht. Die antioxidative Aktivität wurde mit einigen Modifikationen nach der Methode von Amarowicz et al.19 und Chen et al.20 bestimmt. Eine mg/ml-Probenlösung (100 μl) wurde mit 1 ml einer 0,08 mg/ml DPPH-Ethanollösung gemischt. Dann wurde wasserfreies Ethanol auf 4 ml zugegeben. Die Mischung wurde kräftig geschüttelt und 30 Minuten lang im Dunkeln inkubiert. Die Absorption der Lösung wurde bei 517 nm mit dem UV-Vis-Spektrophotometer TU-1810 APC gemessen. Vc wurde als Referenzverbindung verwendet. Alle Tests wurden dreifach durchgeführt. Die Radikalfängeraktivität wird nach folgender Gleichung berechnet:

Dabei ist AB die Absorption der Kontrolle (DPPH ohne Probe) und AA die Absorption der Reaktionsmischung.

Die antioxidative Aktivität wurde durch die Abfangaktivität von 2,2-Hydrazin-bis-(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure)diaminsalz-Radikalkationen (ABTS+) erreicht. Die antioxidative Aktivität wurde mit einigen Modifikationen nach der Methode von Ali et al.21 bestimmt. Vier Milliliter ABTS-Lösung wurden zu 0,1 ml verschiedener Konzentrationen der Probenlösung hinzugefügt. Die Mischung wurde kräftig geschüttelt und 6 Minuten lang im Dunkeln inkubiert. Die Absorption der Lösung wurde bei 734 nm mit dem UV-Vis-Spektrophotometer TU-1810 APC gemessen. Als Referenzverbindung wurde Vc verwendet. Die Radikalfängeraktivität wird nach der folgenden Gleichung berechnet:

Dabei ist AB die Absorption der Kontrolle (ABTS ohne Probe) und AA die Absorption der Reaktionsmischung.

Die Statistiken wurden mit der Software SPSS 26 erstellt. Alle Daten wurden als Mittelwert ± Standardfehler (SE) aus drei unabhängigen Parallelexperimenten dargestellt. Signifikante Unterschiede zwischen den Mittelwerten der Stichproben wurden mit dem Duncan-Test mit einem Konfidenzniveau von 95 % analysiert14. Für die grafische Darstellung der Ergebnisse wurde die Software Origin 2018 verwendet.

Die während der aktuellen Studie verwendeten und/oder analysierten Datensätze sind auf begründete Anfrage beim Erstautor Cai-Yun Chen erhältlich.

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Diese Forschung wurde finanziell unterstützt vom General Program of National Natural Science Foundation of China (82174039), General Project of Shandong Natural Science Foundation (ZR2020MH371), Shandong Taishan Scholars Young Expert Project (tsqn202103110), Young and Creative Team for Talent Introduction of Shandong Province (10073004), Große wissenschaftliche und technologische Innovationsprojekte in der Provinz Shandong (2021CXGC010511), Planungsprojekt für traditionelle chinesische Medizin der Provinz Shandong (2021M139), Sozialwissenschaftliches Planungsprojekt in Binzhou (23-SKGH-002). Bildungsprojekt der Zusammenarbeit zwischen Bildungsministerium, Industrie, Universität und Forschung (220500524270338).

Diese Autoren haben gleichermaßen beigetragen: Cai-Yun Chen und Run Zhang.

School of Public Health and Management, Binzhou Medical University, Yantai, Volksrepublik China

Cai-Yun Chen, Li-Jie Zhang, Zhi-Yong Hu, Xue Mei und Wei Mi

School of Pharmaceutical Science, Binzhou Medical University, Yantai, 264003, Volksrepublik China

Führen Sie Zhang, Shao-Ping Wang und Jia-Yu Zhang aus

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RZ und CC haben den Originalentwurf und die Methodik verfasst. ZH und SW haben Rezension und Redaktion geschrieben. XM und LZ halfen bei der Berechnung und Analyse von Daten. JZ- und WM-Betreuung und Finanzierungseinwerbung. Alle Autoren überprüften das Manuskript und stimmten der veröffentlichten Version des Manuskripts zu.

Korrespondenz mit Wei Mi oder Jia-Yu Zhang.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Chen, CY., Zhang, R., Zhang, LJ. et al. Biotransformation und Bioverfügbarkeit von Wirkstoffen aus Radix Astragali von Poria Cocos während der Festkörperfermentation und In-vitro-Verdauung sowie Bewertung der antioxidativen Aktivität. Sci Rep 13, 6888 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-33969-4

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Eingegangen: 27. Februar 2023

Angenommen: 21. April 2023

Veröffentlicht: 27. April 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-33969-4

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